Terapia epigenética para el tratamiento de la hepatitis B

Molécula natural:  Extracto de Cúrcuma 
Función: el extracto de cúrcuma reprimió la secreción de HBsAg de las células HepG 2.2.15, y también suprimió la producción de partículas de VHB y el nivel de ARN de VHB intracelular en las células HepG 2.2.15, por tanto se puede decir que este extracto inhibe la replicación del VHB. Se descubrió también que la actividad anti-VHB de la cúrcuma está mediada por la mejora de la proteína p53 mediante la transactivación de la transcripción del gen p53
Aplicación:  se puede utilizar como un fármaco seguro y específico para pacientes con enfermedades hepáticas causadas por la infección por VHB.

Referencia:

Kima H, Yoob H, Kim J, Su P, Choi M, Kim M, Choi H , Min J, Kimb Y, Yoon S,  AhnJ. Efecto antiviral de la cúrcuma contra la replicación del virus de la hepatitis B. (Internet). (Citado en 19 de febrero del 2023. Disponible en: cúrcuma

Uso de técnicas de edición genética en la Hepatitis B

Tipo de Técnica: CRISPR/Cas9 in vivo/somática
Dirigido hacia: El ADN circular del virus de la hepatitis B, provoca la destrucción o inactivación de plásmidos virales. 
Dirigido por: ARN guía quimérico (ARNg)
Órgano a tratar: Hígado

Resultados: Varios estudios mostraron que los genomas integrados del VHB se inactivaron o eliminaron al utilizar la técnica de CRISPR/Cas9.  Aunque con el tiempo la inactivación de los genomas del VHB integrados puede reducir la producción de HBsAg, también, puede causar daños en el genoma del huésped, lo que conlleva la riesgo de inestabilidad del genoma  e incluso carcinogénesis.

Referencia: 

1. Chih H, Chen P.  El potencial y los desafíos de CRISPR-Cas en la erradicación del ADN circular cerrado covalentemente del virus de la hepatitis B. (Internet) 2017. (Citado el 12 de febrero del 2023). Disponible en: CRISPR-Cas9

Terapia con células madre en anemia falciforme

Tipo de células Madre: Células madre hematopoyéticas. Multipotencial/mesenquimal

Método de obtención: Existe 3metodos de obtención:

1. Extracción de células madre de la medula ósea, por aspiraciones de las crestas iliacas.
2. A partir de sangre periférica recolectado por leucoféresis, después de emplearse un estimulador de colonia.
3. Extracción de células madre hematopoyéticas del cordón umbilical.

Vía de administración: la vía de administración es parenteral por transfusiones.

Resultados: . Uno de los estudios exploró en 50 pacientes menores de 16 años con anemia falciforme, y se informó tasas de supervivencia sin eventos y sin enfermedad del 82 % y 85 %, después de 11 años.

Referencias: 

1. Cedeño M, Godoy A, Rojas R, Hernández M. Trasplante de células madre hematopoyéticas: tratamiento de neoplasias malignas. (Internet) 2019. (Citado el 5 de febrero del 2023). Disponible en: Células madre
2. Willey J. Trasplante de células madre hematopoyéticas para pacientes con enfermedad de células falciformes. (Internet) 2020. (Citado el 05 de febrero del 2023). Disponible en: Células madre.

 Uso de transgénico animal en la anemia Falciforme

Animal transgénico: Ratones Knockou

Modificación genética: Los hematíes fetales son normales, tras el nacimiento, el gen fetal se desactiva y el otro gen sufre la mutación [Glu6Val,rs334] y produce hemoglobina falciforme (HbS). Los genes que actúan en la activación de Hb adulta son: BCL11A y ZBTB7A 19p13.3] de tal forma que a estos ratones se bloqueó in vitro el gen BCL11A,  dejaron de producir Hb adulta y empezaron a sintetizar Hb fetal.

Uso: Contra la anemia falciforme, actualmente se obtiene células madre de la línea hematopoyética con vector el VIH inactivado se le introduce el gen fetal de la hemoglobina y se desactiva el gen adulto.

Ventajas y desventajas del uso de transgénicos 

Ventajas:

1. Mejora para la investigación, desde el punto de vista del conocimiento del genoma.
2. Avances en estudios de enfermedades animales y humanas, como el cáncer.
3. Producción de fármacos.
4. Aumentar la producción de productos agrícolas.
5. Mejorar la calidad de los alimentos resistencia a plagas y virus.

Desventajas:

1. Al modificar especies ya existentes podemos poner en riesgo especies autóctonas.
2. La expresión de nuevas proteínas donde antes no existían puede provocar alergias.
3. Se usan animales vivos, por eso es primordial determinar que importantes serán los resultados
4. Contaminación genética de vegetales en el ecosistema. 
5. La inserción de antibióticos a plantas podría llevar a la transferencia de genes a las plagas y hacerlas resistentes.

Referencias:

1.  López J.  Terapia génica para la anemia de las células falciformes. (Internet) 2020. (Citado el 29 de enero del 2023). Disponible en: Transgénicos. 
2. Sánchez S. ¿Son los transgénicos peligrosos? ventajas e inconvenientes. (Internet). (Citado el 29 de enero del 2023). Disponible en: Ventajas y desventajas. 
3. Diaz A. Animales transgénicos - Definición, ejemplos y características. (Internet) 2018. (Citado el 29 de enero del 2023) disponible en: Ventajas y desventajas.

 ADN recombinante

ADN recombinante natural

ADN recombinante en virus: Ejemplo, la influenza tipo A tiene 2 tipos de recombinación.

1. Dos o más virus diferentes de influenza A infectan la misma célula huésped y combinan su material genético.

1. Un virus de influenza A puede saltar de un tipo de organismo, a otro y mutar en el huésped.

ADN recombinante artificial 
Tema: Método para obtener antígeno de superficie del virus de la hepatitis b, recombinante, con capacidad inmunogenica superior y su uso en una preparación de vacuna.
Objetivo: Usar el ADN recombinante para elaborar la vacuna.
Gen o secuencia a clonar: Se clono el ADN viral en el sitio de EcoRI pBR322.
Enzima de restricción: Ncol y Sall
Vector: pBS5
Célula receptora: Pichia pastoris
Mecanismo de transferencia: Transformación y transfección por choque térmico.
Métodos de identificación de clones: Cultivo 

Referencias: 
1. Centros para el control y la prevención de enfermedades. Influenza. (internet) 2022. (Citado el 22 de enero del 2023). Disponible en: Como puede cambiar los virus de la influenza

2. Verena G, Penton E, Escobar G, Gálvez M, González M. Método para obtener antígeno de superficie del virus de la hepatitis b, recombinante, con capacidad inmunogenica superior y su uso en una preparación de vacuna. (Internet). (Citado el 22 de enero del 2023). Disponible en: ADN recombinante

Epigenética del la hepatitis B

Los cambios epigenéticos en una persona con hepatitis viral crónico puede provocar un carcinoma hepatocelular (CHC), ya que durante la infección, se produce una metilación del ADN en los genes de las células mononucleares de sangre periférica (PBMC) y en la isla de dinucleótidos de citosina-fosfo-guanina (CpG) en los elementos génicos reguladores, esto provoca el silenciamiento de la expresión génica siendo este un factor de riesgo importante para el CHC. 

Referencia:

Virzi A, González V, Tripón S, Baumert T, Lupberger J. Señalización profibrótica y riesgo de CHC durante la hepatitis viral crónica: desarrollo de biomarcadores. (Internet) 2021. (Citado el 14 de enero del 2023). Disponible en: Epigenética

 Utilización de Southern Blot para el diagnóstico de la hepatitis B (VHB)

Objetivo: Analizar los niveles de expresión de HAT1 en el hígado de personas infectadas con (VHB).
Técnica de Southern Blot
Muestra: Tejidos hepáticos no tumorales en pacientes con carcinoma hepatocelular (HCC)
Tipo de Ácido Nucleico: ARN
Extracción de ARN: El ARN se extrajo del tejido utilizando el reactivo Trizol y con el mismo reactivo se sintetizo la primera cadena de ADNc
Aislamiento cccDNA del VHB: La extracción selectiva de cccDNA del VHB de las células se logro con la utilización del kit SYBR Green Premix. 
Transferencia a Southern Blot del cccDNA de HBV: La muestra de cccDNA del VHB se sometió a electroforesis en gel de agarosa y se transfirió a una membrana Amersham Hybond-N+, seguido de sondeo con "DIG-labeled probes of linear HBx DNA fragments.
Visualización: Autoradiografía de hibridación.
Usos: Determinar la presencia de un gen o fragmentos del ADN específicos en una mezcla de ácidos nucleicos,  identificar genes asociados con enfermedades , e identificar mutaciones, deleciones y dosis génica en caso de ser portadores

Referencia:

Yang G, Feng J, Liu Y, Zhao H, Ying Y, Hongfeng Y, Yun H, Mingming S, Bu Y, Liu L, Liu Z. La señalización de HAT1 confiere ensamblaje y regulación epigenética del microcromosoma ccDNA del VHB. (Internet) 2019. (citado el 08 de enero del 2023). Disponible en: https://uceedu-my.sharepoint.com/personal/jtcaizad_uce_edu_ec/_layouts/15/onedrive.aspx?id=%2Fpersonal%2Fjtcaizad%5Fuce%5Fedu%5Fec%2FDocuments%2Fyang2019%2Ezh%2DCN%2Ees%2Epdf&parent=%2Fpersonal%2Fjtcaizad%5Fuce%5Fedu%5Fec%2FDocuments