PCR para diagnosticar síndrome de Alport

Tema: Análisis clínico y genético del síndrome de Alport y la nefropatía del colágeno IV(α3/α4)
Objetivo: Analizar los genes responsables del síndrome de Alport que son el COL4A3 y COL4A4, con el fin de elegir el tratamiento adecuado para en paciente.
Exámenes de diagnostico primarios: pruebas de audición y visión, análisis de orina, biopsia de riñón.
Diagnostico por PCR:
Tipo de  PCR:     PCR en tiempo real
Muestra: Sangre periférica mediante venopunción antecubital y conservación a 4ºC hasta su procesamiento.
Tipo de Ácido Nucleico: ADN genómico
Extracción de ADN: 

• Lisis: Se aplico proteinasa K y dodecil sulfato sódico con incubación a  55º C durante 16 horas

• Purificación:  Fue tratado con una mezcla de fenol tamponado  y CIAA

• Lavado: Con etanol al 70%

Genes a amplificar: COL4A3, COL4A4, la amplificación se realizo con el producto comercial Mater Mix (Promega)
Ciclos: de 35 a 40 ciclos
Visualización: Los fragmentos amplificados fueron posteriormente visualizados en el gel de agarosa mediante Sybr Safe®
 
Referencia:
Sarmiento R. Análisis clínico y genético del síndrome de Alport y la nefropatía del colágeno IV (α3/α4). Tesis Doctoral. Salamanca, 2019. (Citado el 17 de diciembre del 2022). Disponible en: PCR en síndrome de Alport